D-泛醇泛解酸内酯原料 上海临辰供应

D-泛解酸内酯。现有技术中还有在培养基中培养尖孢镰孢菌，D-泛醇泛解酸内酯原料，在培养后的尖孢镰孢菌与底物混合，水解得到D-泛解酸，内酯化获得D-泛解酸内酯，D-泛醇泛解酸内酯原料，但是本方法采用发酵制备D-泛解酸内酯的过程能耗较高，且产率低，工业成本较高。现有技术中还有以水和甲为溶剂体系，通过添加D-泛解酸内酯作为晶种，诱导结晶获得D-泛解酸内酯的方法，但是本方法在生产过程中采用了甲，生产过程VOC排放较高，D-泛醇泛解酸内酯原料，且通过诱导结晶获得的一次收率较低，产品比旋度较低。

醇脱酶参与的化学酶法合成D-泛解酸内酯与D- 泛解酸内酯的工业合成类似， 从反应出发再经醇脱酶还原， 仅经过三步就合成了D- 泛解酸内酯。这种醇脱酶参与的化学酶法合成过程由德国比勒费尔德大学HEIDLINDEMANN M 等在2015 年设计以和酸乙酯为起始原料， 以L-组氨酸作为**催化剂在酸性条件下发生醛醛缩合反应，得到(R)-中间体1。醇脱酶以为辅底物实现辅酶循环，将中间体1 还原成中间体2，中间体2 *分离直接自发环化成D-泛解酸内酯。反应中D-泛解酸内酯的总得率达55%，产物e.e.值达到95%。

将D-泛解酸内酯水解酶cDNA结构基因分别插入到大肠杆菌胞内表达载体pTrc99a和分泌表达载体pET20b中,构建重组质粒pTrc99a-LAC和pET20b-LAC.将重组载体pTrc99a-LAC转化大肠杆菌JM109.重组菌在IPTG诱导下表达出有活性的重组酶,经SDS-PAGE检测,重组大肠杆菌有分子量约为40 kD的蛋白表达带,重组酶活力平均为39 U/克湿细胞.将分泌重组载体pET20b-LAC转化大肠杆菌BLR(DE3)pLysS,利用IPTG对重组菌进行诱导,D-泛解酸内酯水解酶被分泌表达至大肠杆菌的周质空间,信号肽被正确识别切下后,获得活性的D-泛解酸内酯。D-泛解酸内酯